请写出3-4种pcr技术及其应用。
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一、请写出3-4种pcr技术及其应用。
请写出3-4种pcr技术及其应用。
1. 常规PCR技术：
常规PCR技术是PCR的基础形式，它通过DNA的分离、复制和扩增来产生大量的特定DNA片段。常规PCR主要包括以下步骤：变性、退火、延伸和连接。该技术通常用于：
基因检测与诊断： 常规PCR可用于检测遗传疾病、肿瘤基因、传染病等。医学上，它常被用来进行病原体的检测，例如病毒、细菌等。
DNA克隆： 常规PCR可用于扩增特定基因片段，然后将其插入到载体中，进行基因克隆。
2. 逆转录PCR（RT-PCR）技术：
RT-PCR是在PCR技术基础上，加入了逆转录步骤，将RNA转录为cDNA，再进行PCR扩增。该技术主要用于：
基因表达分析： RT-PCR可以用来研究特定基因的表达情况。通过逆转录，将mRNA转录为cDNA，然后进行PCR扩增，以检测该基因是否在特定条件下被表达。
病毒学研究： RT-PCR被广泛用于检测病毒RNA，例如HIV、流感病毒等，因为这些病毒的遗传物质是RNA。
3. 实时定量PCR（qPCR）技术：
实时定量PCR是一种可以实时监测PCR扩增过程的技术。它结合了PCR和荧光探针技术，能够在PCR反应进行的同时，对DNA量进行定量分析。该技术主要用于：
基因表达定量分析： qPCR可以用来精确测量特定基因在生物体内的表达水平，从而研究基因的调控机制和生物学功能。
病原体检测： 在医学和临床诊断中，qPCR被广泛用于病原体的快速检测，如检测病毒、细菌等。
拷贝数变异分析： qPCR可用于研究基因的拷贝数变异，这在疾病研究和个体基因分析中具有重要意义。
4. 数字PCR技术：
数字PCR是一种高精度的PCR技术，它将PCR反应分割成数千至数百万个微小的单独反应，然后通过统计正反应的数量，来确定初始DNA或RNA的分子数。该技术主要用于：
极低拷贝数目标的定量： 与qPCR相比，数字PCR对低拷贝数目标（例如稀有突变、微量RNA等）的定量更为准确和敏感。
病毒荷载检测： 适用于病毒荷载（病毒在体内的数量）的准确测量，例如HIV病毒荷载检测。
二、数字PCR介绍
数字PCR系统作为一种常用且有效的生命科学研究工具被广泛接受并开始进军临床市场。法国Stilla Technologies公司发布高通量数字PCR系统-Naica HT，配合新型的Opal芯片，较Naica数字PCR系统的通量有效提高四倍。
此外，该公司发布6色数字PCR检测系统的开发项目，增强系统的检测能力，并寻求与诊断领域和诊断试剂制造商的合作机会。
Stilla公司商业运作副总裁Caroline Charky在2019年2月的SLAS大会（Laboratory Automation and Screening Conference）会议上发布高通量数字PCR系统Naica HT和新型的Opal芯片，每天能检测≥240个样本，并在这次会议上获得了NPA新产品大奖。
Charky介绍道“Opal芯片采用了与第一代Naica系统相同的微流控技术，在芯片内部生成微滴。高通量Naica HT平台和Opal芯片与第一代Naica系统相比，提高了样本容量，并且在价格方面更有竞争力。”
Naica数字PCR系统由三部分组成：Geode装置包括自动化的微滴生成和PCR扩增步骤，在自组装的微滴阵列上进行PCR扩增大约需要1小时。Prime3微滴阅读分析系统，可以读取三色荧光，10分钟可以读取12个样本。Crystal Miner数据分析，能够自动识别三色荧光中每个阴阳性微滴，最终计算出目的DNA的绝对含量。
“Naica 数字PCR系统使用的Sapphire芯片是第一代芯片，能够运行4个样本，每次可运行3张芯片，每天可以做≥60个样本。然而，在欧洲，亚洲，美国很多客户有高通量的需求，现在配合Naica HT高通量数字PCR系统，在与Sapphire同样大小的Opal芯片上可以同时进行16个样本，一次反应可以运行48个样本。”Charky说。
Stilla公司进行市场调研时，发现某些实验室特别是食品检测，肿瘤领域的应用中，如肿瘤病人的伴随诊断和用药监控以及需要数字PCR对阴性结果验证的大型qPCR实验室，都有高通量的需求。
Naica HT高通量数字PCR系统也能够进行三色多重反应，每次实验时间2.5小时，每天可以做五轮实验，Charky说道：“Naica HT高通量数字PCR系统每天可以做240个样本检测，也就是可以进行720个目的基因的检测。”
与Sapphire芯片相比Opal芯片反应体积更小。
“在Opal芯片中我们将反应体积从25μL降到了8μL。”Charky说。“你可以用更少的试剂”她说，对于要求更高灵敏度的实验，Opal芯片有一个集合两到三个密闭反应孔的策略，在95%的置信区间，灵敏度可达0.2copies/25μL。高通量Naica HT数字PCR系统兼容Sapphire芯片和Opal芯片。Naica数字PCR系统可以通过升级到高通量Naica HT数字PCR系统。
雅培实验室的快速诊断部门高级科学家Aric Joneja正在使用Stilla公司的Naica数字PCR系统进行产品研发。他们两年前购买了Naica数字PCR系统用于微滴PCR和微滴RT-PCR。他们计划开始使用Naica HT和Opal芯片。Joneja认为Naica系统人工操作少，耗材少并且操作简便。同时指出，Stilla具有数据回溯查看功能，很容易进行数据质控，查看数据原始结果。Joneja指出实验室肯定不会已经发现了三色检测系统还买两色检测系统。
在后续的访谈中Charky指出Stilla的专利完全不同于Bio-Rad。“每一个部分都是不同的，”她说，“是完全不同的技术。”
同时，Stilla公司正在开发六色检测的数字PCR系统，进行多重目标基因的数字PCR检测，“我们是全球第一家开发六色数字PCR系统的公司”Charky说。
正如之前的报道，2017年发表了用三色数字PCR检测EGFR突变，本月在O ncotarget杂志上发表了使用六色数字PCR检测非小细胞肺癌相关的突变，特别是EGFR基因的致敏和耐药突变的液态活检方法。
“六色数字PCR系统目前还在测试阶段，Stilla预计在2020或2021年发布，”Charky说,“我们公司作为仪器厂商，正在与用Naica开发和优化试剂的公司共同开发试剂，”Charky说,“一家使用Naica系统的德国研发公司，正在开发一种转基因生物的数字PCR检测方法，Stilla计划与这家公司合作推出完整的解决方案，另一家位于蒙彼利埃的公司正在开发用于CE-IVD的CTC、液体活检试剂盒。同时公司也自行开发临床项目，”Charky说,“已经有研发项目的产品能够最终获得CE-IVD。”
自从2016年发布Naica系统，公司已经历3年时间，Charky说,最近获得了illumina的融资。同时也是欧盟与皇家飞利浦主导的“改善癌症护理的液体活检和成像即LIMA”项目的合作方。
去年Stilla获得了巴黎39家医院联盟的公开招标，这39家医院将在接下来四年内完成Naica系统的采购。为了支持企业快速发展，公司正在扩大，在今年底将扩大三倍面积，Charky说。
NaicaTM Crystal 数字PCR系统产品信息请点击：
到此，以上就是小编对于数字pcr应用的问题就介绍到这了，希望介绍关于数字pcr应用的2点解答对大家有用。
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